| Attributes | Values |
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| type
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| Thesis advisor
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| Author
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| alternative label
| - Effect of growth conditions on the production of native and foreign proteins by Myxococcus xanthus
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| dc:subject
| - Myxococcus xanthus
- Thèses et écrits académiques
- Protéines
- Plasmides
- Cellules immobilisées
- Excrétion
- Phosphatase acide
- Myxobactéries
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| preferred label
| - Effet des conditions de croissance sur la production de protéines endogènes ou étrangères par Myxococcus xanthus
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| Language
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| Subject
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| dc:title
| - Effet des conditions de croissance sur la production de protéines endogènes ou étrangères par Myxococcus xanthus
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| Degree granting institution
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| note
| - Myxococcus xanthus is a non pathogenic gram negative bacteria that secretes numerous proteins into its growth medium. The total amount of extra cellular proteins increases up to two fold with various conditions of culture : temperature, shaking, medium, ions Ca2+. Myxococcus Xanthus is also able to secrete foreign proteins. These proteins are coded by genes that are cloned into the plasmid RP4. This plasmid is used as a vector and is maintained in Myxococcus Xanthus integrated into the chromosome. 1- The polygalacturonate lyases from Erwinia chrysanthem are constituvely produced, but the activity measured in the culture supernatant is very low because these enzymes are very sensitive to the proteases secreted by Myxococcus Xanthus. 2- The pH 2,5 acidic phosphatise from Escherichia coli is first produced mainly in the periplasm, then at the end of log phase it is recovered from the extra cellular fluid. Growth conditions were screened in order to optimize acidic phosphatise production. We have found conditions that significantly increase the total amount of proteins in the medium, and trigger even more the production of acidic phosphatise (up to 3 fold). When cells are immobilized in 2% carraghenan beads, production of total proteins and acidic phosphatase outside the cells were unmodified, whereas the proteins and activity are differently distributed between the gel and the liquid medium : most extra cellular proteins are trapped within the gel (75%) while acidic phosphatise activity is mostly recovered in the liquid medium. However extra cellular proteolytic and bacteriolytic activities produced into the medium or inside the beads are greatly increased and stabilized as compared to the control. Also immobilized cells grown in a reactor secreted continuously native and foreign proteins.
- Myxococcus xanthus est une bactérie à gram négatif qui secrète des protéines. La sécrétion des protéines totales peut être augmentée, jusqu'à un facteur 2, en faisant varier des conditions de culture : température, agitation, milieu et en présence des ions Ca2+. Myxococcus xanthus est aussi capable d'excréter des protéines étrangères, en utilisant comme vecteur de clonage le plasmide RP4 qui pénètre dans la cellule et s'intègre dans le chromosome bactérien. 1- Les polygalacturonates lyases d'Erwinia chrysanthemi sont produites d'une manière constitutive, mais l'activité détectée dans le surnageant de culture est très faible, car ces enzymes sont sensibles aux protéases excrétées par Myxococcus xanthus. 2- La phosphatase acide (pH optimum 2,5) d'Escherichia coli est en partie accumulée dans le périplasme, et en partie relâchée dans le surnageant de culture où elle est relativement stable. On a pu à la fois augmenter sa production et favoriser sa sortie dans des conditions de culture qui favorisent la sécrétion des protéines totales mais dans ce cas, l'augmentation peut être plus importante (jusqu'à un facteur 3). L'immobilisation des cellules en croissance dans un gel de carréghénane, augmente l'activité spécifique des protéases (de 6 à 7 fois environ) dans le gel, stabilise l'activité bactériolytique dans le milieu de culture, mais ne modifie pas la quantité de protéines totales secrétées, celles-ci sont essentiellement retenues dans le gel, tandis que les protéines étrangères sont surtout relâchées dans le milieu extérieur. Par immobilisation des cellules, nous avons pu réaliser des productions en continu de protéines endogènes et de la phosphatase acide.
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| http://iflastandar...bd/elements/P1001
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