| Attributes | Values |
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| type
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| Thesis advisor
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| Praeses
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| Author
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| alternative label
| - Outer membrane antigens of brucella : immunochemical study and evaluation of their protective activity
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| dc:subject
| - Antigène CD14
- Brucella
- Relations hôte-parasite
- Expression génique
- Immunochimie
- Thèses et écrits académiques
- Cellules souches
- Anticorps monoclonaux
- Réponse immunitaire
- Antigènes de surface
- Protéines recombinées
- Buvardage
- Brucellose -- Prévention
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| preferred label
| - Antigènes de la membrane externe de brucella, étude immunochimique et évaluation de l'activité protectrice
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| Language
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| Subject
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| dc:title
| - Antigènes de la membrane externe de brucella, étude immunochimique et évaluation de l'activité protectrice
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| Degree granting institution
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| Opponent
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| note
| - La brucellose est une zoonose majeure, mondialement répandue, qui affecte les animaux producteurs de lait et de viande, dont l'agent étiologique sont les bactéries du genre brucella. La lutte contre la brucellose est basée sur la vaccination et le dépistage. Les vaccins actuels, bien qu'efficaces, compliquent le dépistage de la maladie car ils provoquent des réactions sérologiques difficiles à distinguer de celles dues à l'infection. Par ailleurs, le dépistage est basé sur la détection des anticorps dirigés contre les lipopolyosides (lps) à la surface des brucella, et la protection est due aux antigènes protecteurs majeurs, probablement le LPS et les protéines de la membrane externe (PME). Nous avons réalisé une caractérisation immunochimique des LPS-S et R en électrophorèse en gel de polyacrylamide et immunoempreinte. Des profils caracterisés par de fines bandes de haut poids moléculaire, associés à la présence prédominante des épitopes A et M, ont été identifiés pour les LPS-S. Les profils des SPS-R des souches en phase rugueuse (r) en général comportent deux bandes dans le bas du gel. Le développement d'une méthode immunoturbidimétrique, spécifique d'un épitope de la chaine o du LPS-S, a permis de doser le LPS-S de brucella. Cette approche quantitative a mis en évidence des variations dans l'expression du LPS-S chez la souche vaccinale B. Melitensis rev.1(s) et chez la souche B. Melitensis ep de phénotype s-r. Des variations dans l'expression du LPS-S en longueur et en quantité des molécules présentes à la surface-, affectent l'accessibilité des anticorps monoclonaux (ACM) dirigés contre les PME majeures et mineures et le LPS-R. Des variations dans la reconnaissance des PME par des acm ont été observées parmi les souches en phase r, dont B. Ovis et B. Canis. La cytométrie en flux associée à l'utilisation des acm a permis d'analyser les populations cellulaires de brucella et de révéler une hétérogénéité dans l'expression de la PME de 31-34kda chez B. Melitensis b115 (r) et B. Canis (r). Des épreuves de protection passive chez la souris utilisant des acm anti-PME et anti-LPS-R montrent d'une part une protection tres limitée pour quelques uns des acm contre une souche en phase lisse (s) (b. Abortus 544), et d'autre part une protection importante contre une souche en phase r (b. Ovis bow 63/290). L'activité protectrice des pme recombinantes de brucella a été évaluée par des épreuves de protection active chez la souris. Trois pme (16, 5, 25 et 36 kda), obtenues comme protéines de fusion, et administrées en mélange, se sont montrées inefficaces. La pme de 25 kda de B. Melitensis, exprimée à la surface d'E. Coli, a réduit l'infection splénique vis-a-vis de l'infection par trois souches de B. Melitensis utilisées pour l'épreuve. La réponse sérologique est caracterisée par des anticorps majoritairement d'isotype IgG2a reconnaissant la protéine native à la surface de brucella. Ces résultats montrent l'importance des structures de surface (LPS et PME) qui interviendront probablement comme principes actifs des nouveaux vaccins envisagés pour ameliorer la protection et la distinction entre les animaux infectés et vaccinés
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