Attributes | Values |
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Thesis advisor
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Praeses
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Author
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dc:subject
| - IDS
- Différenciation cellulaire
- Adipocytes
- Motifs hélice-boucle-hélice
- Cytologie
- Thèses et écrits académiques
- Facteurs de transcription
- Cellules 3T3 -- Dissertation universitaire
- Protéine d'inhibition de la différenciation de type 1 -- Dissertation universitaire
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preferred label
| - Expression et fonction des IDS, facteurs de transcription de la famille hélice-boucle-hélice, leur rôle dans l'adipogenèse des préadipocytes 3T3
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Language
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Subject
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dc:title
| - Expression et fonction des IDS, facteurs de transcription de la famille hélice-boucle-hélice, leur rôle dans l'adipogenèse des préadipocytes 3T3
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Degree granting institution
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Opponent
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note
| - Id members belong to a group of ubiquitous nuclear proteins that possess the helix-loop-helix (1-aH) motif. Ids prevent transcriptional action of dominant positive bHLH proteins by forming nonfunctional heterodimers. We have studied the expression of the Id1, Id2 and Id3 genes during adipose differentiation of 3T3-F442A cells. Ail three Id mRNAs sharply decline in the course of adipose conversion, and their virtual disappearance precedes the differentiation process. The decrease in Id2 and Id3 is associated with adipose differentiation rather than with growth arrest since it is not observed in 3T3-C2, a fibroblastic line with low susceptibility to adipose conversion. Stahly transformed preadipose cells expressing an Id3 eDNA under the control of a viral promoter are virtually unable to differentiate. We postulate that the Id3 protein is a negative regulator of fat cell formation and presumably acts by preventing an as yet unidentified basic helix-loop-helix protein from activating the program of differentiation. In the aim to define partners ofld2 and Id3, we have investigated the possible interaction between Ids and ADDl/SREBP-lc (adipocyte determination and diffèrentiation factor ]/sterol regulatory element binding protein 1). This transcription factor is a member of the basic helix-loop helix-leucine zipper (bHLH-LZ) family and controls the expression of severa! key genes of adipose metabolism. Gel mobility shift assays performed with in vitro-translated ADD1, Id2 and Id3 proteins and a FAS promoter oligonucleotide show evidence for a marked inhibition of the formation of DNA ADD1 complexes by Id2 or Id3 proteins. Co-immunoprecipitation studies using in vitro-translated proteins further demonstrate the physical interaction of Id and ADD1/SREBP-lc proteins in absence of DNA. Using fatty acid synthase (FAS) gene as a model of ADD1-regulated promoter in transiently transfected isolated rat adipocytes or mature 3T3-L1 adipocytes, a potent inhibition of the activity of the FAS-CAT reporter gene has been observed by overexpression of Id2 and Id3. Reciprocally, cotransfection of Id3 antisense and ADD1 expression vectors in preadipocytes potentiates ADDl/SREBP-lc effect on the FAS promoter activity. Finally, in the non adipogenic NIH-3T3 cell line, most of the ADD1-mediated trans-activation of the FAS promoter has been counteracted by cotransfection ofid2 and Id3 expression vectors. By using the \"two-hybrid\" system, we have shown the existence of an original and functional complex Id2/ADD1 in vivo. We have also demonstrated that there is a dramatic rise of Id2 and Id3 mRNA levels when 3T3-Ll adipocytes or isolated rat fat cells have been exposed to anti-lipogenic agents. Taken together, our data show that Id products are functionally involved for modulating ADD1/SREBP-1c transcriptional activity, and thus lipogenesis in adipocytes.
- Les protéines Id ou \" inhibitors of DNA binding \" sont des facteurs de transcription appartenant à la famille HLH (Hélix-Loop-Hélix). Contrairement aux autres membres de cette famille, ces facteurs exercent leur action via la formation de dimères inactifs avec les protéines dites \" dominantes positives\". L'expression des gènes Id1, Id2 et Id3 a été étudiée au cours de la différenciation adipocytaire des cellules 3T3-F442A et 3T3-L1. Les messagers correspondant abondamment exprimés dans les préadipocytes, diminuent de façon importante au stade d'adipocytes matures. Alors que la chute d'expression des gènes Id2 et Id3 est associée au phénotype adipocytaire, celle du gène Id1 est liée à l'arrêt de croissance car la disparition du messager Id1 est également observée dans des fibroblastes 3T3-C2, ne pouvant se différencier en adipocytes. La surexpression constitutive de Id3 dans les préadipocytes 3T3-F442A, inhibe le processus de différenciation suggérant un rôle déterminant de ce facteur dans le programme de différenciation. Le mode d'action des protéines Id2 et Id3 a été étudié dans un deuxième temps. Le facteur ADD1/SDREBP-1c à motif bHLH-LZ (adipocyte determination and differentiation factor 1/sterol regulatory element binding proteins-1c) a été proposé comme partenaire des Ids. L'expression de ADD1/SREBP-1c est induite au cours de la différenciation adipocytaire, ce facteur trans-active les gènes clés du métabolisme des lipides et joue, de ce fait, un rôle important dans la mise en place du phénotype adipocytaire. Par des expériences in vitro de retardement sur gel et de co-immunoprécipitation, nous montrons un déplacement de la liaison de l'homodimère ADD1/ADD1 sur le site consensus \" boîte E \" du promoteur de la FAS en présence des facteurs Id2 et de Id3. In vivo, la surexpression de chacun des Ids dans des adipocytes matures entraîne une puissante inhibition du promoteur de la FAS fusionné au gène rapporteur CAT. A l'inverse, la cotransfection des vecteurs d'expression Id3 antisens et ADD1/SREBP-1c dans des préadipocytes potentialise les effets de ADD1/SREBP-1c sur l'activité du promoteur de la FAS. Enfin, dans des cellules d'une lignée non adipogénique NIH-3T3, l'activité trans-activatrice de ADD1 sur le promoteur de la FAS est en grande partie contrecarrée par les vecteurs d'expression Id2 et Id3. Des expériences in vivo par \"double hybride\" vérifient l'existence du dimère Id2/ADD1, suggérant ainsi la formation d'un complexe original et fonctionnel. Bien que l'expression des facteurs Id2 et Id3 chute au cours de la différenciation, nous démontrons qu'elle est reinductible dans des adipocytes matures 3T3-Ll ou isolés à partir du tissu adipeux de rats traités avec des agents anti-lipogéniques tels que les activateurs de la voie de l'AMPc. L'ensemble de ces données montre que les facteurs Ids sont fonctionnellement impliqués dans la régulation de l'activité transcriptionnelle de ADD1/SREBP-1c. En conséquence, les facteurs Ids peuvent être considérés comme des modulateurs de la lipogenèse adipocytaire.
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http://iflastandar...bd/elements/P1001
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