| Attributes | Values |
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| type
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| Thesis advisor
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| Author
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| alternative label
| - Fonctionnalisation des laccases, études de la plasticité des régions amino et carboxy-terminales
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| dc:subject
| - Laccase
- Glycosylation
- Thèses et écrits académiques
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| preferred label
| - Functionalization of laccases, studies on the amino and carboxy–termini plasticity
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| Language
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| Subject
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| dc:title
| - Functionalization of laccases, studies on the amino and carboxy–termini plasticity
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| Degree granting institution
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| note
| - Carboxy or amino terminus variants of the Trametes sp. strain C30 LAC3 laccase were generated and produced in Saccharomyces cerevisiae. All the structural modifications introduced in LAC3, namely a 6 His tagged N (6HN) or C (C6H) terminus, a C-terminal deletion of the last 13 residus (CΔ) and a 6 His tagged C-terminus of the deletant (CΔ6H) were found compatible with the function of the enzyme. In addition, a big GST tagged laccase in C-terminus also had been constructed for the first time, which probed the big molecule effect to laccase terminus plasticity preliminarily. Production of some of the mutants was decreased and resulted in the synthesis of a higher proportion of heterogeneously glycosylated variants. Comparison of CΔ6H and one of its glyco-variant revealed that over glycosylation did not affect enzyme properties. Laccase catalytic properties were variably affected by the mutations. Consequences of mutagenesis were discussed depending on the position of the tag or the extention of the deletion.
- Des variants de la laccase LAC3 de Trametes sp. C30 ont été réalisés et produits chez la levure Saccharomyces cerevisiae . Les constructions 6HN et C6H, correspondent respectivement à LAC3 avec une étiquette six His en N-terminal et en C-terminal. Une délétion des 13 derniers résidus du domaine C-terminal a donné la construction CΔ. Cette même construction a été étiquetée en C-terminal par six His, donnant CΔ6H. Afin d’étudier l’effet de l’ajout de long domaines sur la plasticité de l’enzyme, la construction CGST a été réalisée. Elle correspond à la fusion de la laccase avec la protéine GST en C-terminal. Globalement, toutes les modifications structurelles introduites dans LAC3 semblent compatibles avec la fonction de l'enzyme. La production de certains des mutants a été diminuée. Les propriétés catalytiques de la laccase ont été affectées de manière variable par les mutations. Les conséquences des modifications introduites sont discutées selon la position de l'étiquette ou l'extension de la délétion. D’autre part, nous observons également la synthèse d'une proportion plus élevée de protéines (hyper)glycosylées. La comparaison entre CΔ6H et l’une des formes hyperglycosylées du même variant révéle que la sur-glycosylation n’affecte pas les propriétés de l'enzyme.
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