| Attributes | Values |
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| type
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| Thesis advisor
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| Praeses
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| Author
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| alternative label
| - Development of innovative gene therapy approaches for myotubular myopathy
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| dc:subject
| - Aav
- Muscle
- Dependovirus
- Thérapie génique
- Thèses et écrits académiques
- Muscles -- Dissertation universitaire
- CRISPR-Cas9
- Crispr
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| preferred label
| - Développement d'approches de thérapie génique innovantes pour la myopathie myotubulaire
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| Language
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| Subject
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| dc:title
| - Développement d'approches de thérapie génique innovantes pour la myopathie myotubulaire
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| Degree granting institution
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| note
| - X-linked myotubular myopathy (XLMTM) is a severe congenital muscle disease that mainly affects boys and is characterized at birth by generalized muscle weakness leading to respiratory insufficiency. This genetic disease is caused by mutations in the MTM1 gene that codes for a phosphoinositide phosphatase named myotubularin. No curative treatment is currently available, but a gene therapy approach using a serotype 8 adeno-associated viral (AAV) vector that carries MTM1 has been developed and is tested in a clinical trial in patients.Since AAV vectors derived from natural serotypes have some limitations, in recent years new capsids with increased potency and specificity for muscles have been bioengineered. In this context, the first objective of my thesis was to study the tissue tropism of a novel vector named AAVpo1.A1. This capsid was compared to other vectors known to transduce efficiently skeletal muscles by intravenous injection in wild type (WT) mice. The biodistribution and therapeutic effect of an AAVpo1.A1-MTM1 vector was then assessed in myotubularin deficient mice (Mtm1-KO), an animal model of myotubular myopathy. The results showed that systemic administration of this vector lead to a better expression of the transgene in several skeletal muscles with liver detargeting and corrected the pathology of mutant mice until the end of a 3-month study. Therefore, AAVpo1.A1 may represent a promising capsid for the development of gene therapy products for muscular diseases.The long-term benefit of AAV-mediated gene replacement therapy in muscles is currently unknown but may decline with time as vector genomes are kept in the nuclei as episomes. Therefore, I developed an alternative approach by gene editing using the CRISPR-Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats-CRISPR associated protein 9) system in order to correct mutations directly in the myotubularin gene. Several single-guided RNA (sgRNAs) were designed and selected in cultured murine cell lines under various conditions and a preclinical study was initiated in Mtm1-KO mice with AAV vectors expressing the CRISPR-Cas9 system.
- La myopathie myotubulaire liée au chromosome X (XLMTM) est une maladie congénitale sévère qui affecte principalement les garçons et se manifeste à la naissance par une faiblesse musculaire généralisée conduisant à une insuffisance respiratoire. Cette maladie génétique est causée par des mutations dans le gène MTM1 qui code pour une phosphatase à phosphoinositides nommée myotubularine. Aucun traitement curatif n'est à ce jour commercialisé, mais une thérapie génique avec un vecteur dérivé d'un virus adénovirus-associé (AAV) de sérotype 8 qui exprime MTM1 a été développé et fait l'objet d'un essai clinique chez les patients.Etant donné que les vecteurs dérivés de sérotypes naturels d'AAV présentent certaines limitations, des technologies de bio-ingénierie ont été développées et permis d'identifier de nouvelles capsides AAV plus puissantes et plus spécifiques pour le muscle. Dans ce contexte, le premier objectif de ma thèse a été de caractériser le tropisme tissulaire d'un nouveau vecteur nommé AAVpo1.A1. Une étude comparative avec d'autres vecteurs AAV couramment utilisés pour leur capacité de transduction des muscles squelettiques a premièrement été menée chez des souris saines par administration systémique. L'effet thérapeutique d'un vecteur AAVpo1.A1-MTM1 a ensuite été étudié chez des souris déficientes en myotubularine (Mtm1-KO), un modèle murin de la myopathie myotubulaire. Les résultats ont montré que l'injection intraveineuse du vecteur AAVpo1.A1 conduisait à une meilleure expression du transgène dans plusieurs muscles squelettiques ainsi qu'à une faible transduction du foie comparé aux autres vecteurs, et permettait de corriger le phénotype musculaire des souris mutantes. Ainsi, l'AAVpo1.A1 pourrait représenter une capside à fort potentiel pour le développement de produits de thérapie génique pour des maladies musculaires.Cependant, l'un des inconvénients de la thérapie génique par addition de gènes est l'incertitude à ce jour d'un effet thérapeutique à long terme, le transgène restant en forme épisomale dans le noyau de la cellule hôte. Ainsi, j'ai également développé pendant ma thèse des approches d'édition génique en utilisant le système CRISPR-Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats-CRISPR associated protein 9) afin de corriger la mutation présente dans le gène Mtm1 des souris mutantes. Après des optimisations in vitro afin de sélectionner des ARN guides efficaces, une étude préclinique chez les souris Mtm1 KO a été initiée avec des vecteurs AAV exprimant le système CRISPR-Cas9.
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| http://iflastandar...bd/elements/P1001
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