| Attributes | Values |
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| type
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| Thesis advisor
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| Praeses
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| Author
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| alternative label
| - Biophysical study of LFA-1 nanoclusters activation and their role in CD8+ T cell cytotoxic activity
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| dc:subject
| - Antigène LFA-1
- LFA-1
- Lymphocyte T
- Thèses et écrits académiques
- Intégrines
- Synapse immunologique
- Cellules suppressives
- Microscopie à super-résolution
- Microscopie de super résolution
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| preferred label
| - Étude biophysique de l'activation des nanoclusters de LFA-1, et de leur rôle dans l'activité cytotoxique des lymphocytes T CD8+
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| Language
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| Subject
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| dc:title
| - Étude biophysique de l'activation des nanoclusters de LFA-1, et de leur rôle dans l'activité cytotoxique des lymphocytes T CD8+
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| Degree granting institution
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| note
| - L'adhésion est cruciale pour la réponse cytotoxique du lymphocyte TCD8+, tant pour sa motilité, que pour le développement de la synapse immunologique qu'il construit avec une cellule présentatrice d'antigène. L'intégrine LFA-1 (Lymphocyte Function-associated Antigen 1), est un important médiateur de cette adhésion. En effet, elle peut adopter différentes conformations spatiales, chacune développant une affinité différente pour son ligand (et notamment ICAM-1, pour InterCellular Adhesion Molecule 1), ce qui permet au lymphocyte T de faire évoluer ses capacités adhésives en fonction de la situation. En particulier, il a été démontré dans la littérature que la stimulation du TCR (T Cell Receptor) peut déclencher l'activation des molécules de LFA-1 (haute affinité pour ICAM-1), qui sont alors observées sous forme de nanoclusters. Dans cette thèse, mon premier objectif a été de mesurer l'effet de la stimulation TCR sur l'activation et l'organisation spatiale de LFA-1. Des approches de microscopie confocale et de cytométrie en flux ont démontrées une activation progressive de LFA-1 avec le degré de stimulation du TCR. Dans un second temps, j'ai étudié l'organisation spatiale de LFA-1 par microscopie STED (Stimulated Emission Depletion Microscopy). La détection des clusters par \"machine-learning\" a révélé que la forme inactive de LFA-1 existe également sous forme de nanoclusters, répartis de manière homogène dans le plan d'adhésion du lymphocyte T, contrairement aux nanoclusters actifs qui se trouvent dans des endroits spécifiques : l'uropode dans le cas de la cellule en migration, ou bien organisés sous forme de ceinture dans le cas de la cellule formant une synapse immunologique. La caractérisation plus poussée de ces nanoclusters, et en particulier de leur taille et de leur composition, suggère qu'ils seraient des unités adhésives, capables de basculer d'un état conformationnel à un autre, en fonction du degré d'engagement du TCR. Le second objectif de mes travaux a été de comprendre le lien entre activation de LFA-1, adhésion et cytotoxicité. Pour cela, j'ai utilisé la cytométrie en flux, qui a montré que l'activation de LFA-1 et la sécrétion des granules lytiques se déroulent à partir de différents seuils de stimulation du TCR. J'ai également développé une approche de microscopie \"live\" qui mesure les interactions ainsi que la destruction de cellules cibles (offrant différents niveaux de stimulation) par des lymphocytes TCD8+. Cela a montré que les cellules cibles exprimant moins de molécules stimulatrices du TCR ont de plus faibles probabilités d'être touchées et tuées par le lymphocyte T CD8+. J'ai aussi mesuré l'influence de l'ICAM-1 sur les processus d'activation de LFA-1, de l'adhésion qui en découle, ainsi que de la cytotoxicité. En effet, les données de la littérature suggèrent que la présence d'un ligand (ici, ICAM-1) est nécessaire pour l'activation de LFA-1. En réutilisant les méthodes précédentes, j'ai observé qu'une diminution de la disponibilité des molécules d'ICAM-1 mène à une baisse de l'activation de LFA-1, ce qui a eu un impact significatif sur l'adhésion du lymphocyte ainsi que sur ses capacités cytotoxiques. Un autre aspect de ma thèse a été le développement d'un modèle mésoscopique numérique et physique, basé sur mes données expérimentales. J'ai modélisé une synapse immunologique, composée des membranes d'une cellule cible et d'un lymphocyte TCD8+. Les molécules de chaque membrane sont capables d'interagir, ce qui aboutit à l'émergence de motifs et de dynamiques observables dans de réelles synapses immunologiques. En conclusion, ces travaux de thèse apportent de nouvelles connaissances sur le lien étroit entre la stimulation du TCR et l'activation de LFA-1 ainsi que son organisation spatiale. LFA-1 apparaît comme une molécule clef de la réponse cytotoxique, en mesure de moduler l'adhésion via son organisation en nanoclusters, capable de basculer d'un état conformationnel à un autre.
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| http://iflastandar...bd/elements/P1001
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