"Epig\u00E9n\u00E9tique" . "Col de l'ut\u00E9rus -- Cancer" . . "Papillomavirus" . "5-Aza-2'-Deoxycytidine" . . "Prot\u00E9ines virales" . "Oncog\u00E8nes" . . . . . "\u00C9pig\u00E9n\u00E9tique" . . . . . "Text" . "R\u00E9gulation de l'expression des oncog\u00E8nes du papillomavirus humain de type 16, \u00E9tude dans des lign\u00E9es cellulaires de cancers du col de l'ut\u00E9rus trait\u00E9es avec un agent d\u00E9m\u00E9thylant" . "TBX2" . . "R\u00E9gulation de l'expression des oncog\u00E8nes du papillomavirus humain de type 16, \u00E9tude dans des lign\u00E9es cellulaires de cancers du col de l'ut\u00E9rus trait\u00E9es avec un agent d\u00E9m\u00E9thylant" . "Oncogene expression regulation of human papillomavirus type 16, study in cell lines of cervical cancers with a demethylating agent" . "Cancer" . . "Th\u00E8ses et \u00E9crits acad\u00E9miques" . . . . . . "MiR-375" . . . "Human papillomaviruses (HPV) are small, non-enveloped double-stranded DNA viruses and infect cutaneous and mucosal epithelia. Highly widespread in the human population, infections are mostly asymptomatic, while a minority causes cutaneous and genital warts, and carcinomas. HPV-induced cancers represent 640 000 cases in 2012 worldwide and are localized at the anogenital and head and neck sites.Cell transformation is induced by the overexpression of two viral oncoproteins E6 and E7, which are necessary for the initiation, promotion and progression of the cancerous phenotype. Indeed, their extinction causes cancer cell death. E6 and E7, for example, promote the degradation of p53 and pRb, thus inducing uncontrolled and increased proliferation of infected cells. But the two viral oncoproteins also interact with more than 150 protein partners and deregulate cell homeostasis. Interestingly, E6 and E7 modulate the expression of many proteins involved in the establishment of epigenetic marks, regulating gene expression. Furthermore, the overexpression of viral oncoproteins may be related to viral genome DNA methylation.Since E6 and E7 hijack epigenetic mechanisms, the aim of the thesis was to study the molecular mechanisms regulating the oncoprotein expression during the treatment of cervical cancer cells by a DNA demethylating agent, the 5-aza-2'-deoxycytidine (5azadC).In cervical cancer cells, we observed that a demethylating treatment induced E6 protein repression and destabilization of its transcripts, suggesting the involvement of a miRNA. Among miRNAs targeting viral transcripts, miR-375 was most likely to be involved this destabilization because (i) its promoter methylation increases with the severity of cervical lesions, (ii) it targets viral transcripts at five different regions, and (iii) its expression is increased in cervical cancer cells treated with 5azadC. In our experiences, miR-375 was indeed involved in the partial repression of viral transcripts during treatment. The results of this study further suggest that another molecular mechanism might be implicated in this repression. This is why, in a second step, we studied the possible involvement of a transcription factor, TBX2, in the viral transcript repression. Although the transcriptional rate of TBX2 is increased in cells treated with high concentrations of 5azadC, our results suggest that the protein is not expressed in cells, even after treatment, and that TBX2 does not regulate the viral promoter activity integrated into the cellular genome.Cell treatment with demethylating agent also leads to loss of viability, in particular in Ca Ski cells. Indeed, 5azadC induces a G2/M cycle arrest in these cells, an increase of Sub-G1 cells percentage and a PARP cleavage. While 5azadC is already used in clinical practice for the treatment of other cancers, our data shed new light on the molecular mechanisms of 5azadC in cancers induced by HPV, which could be treated by this molecule or analogues." . "Les papillomavirus humains (HPV) sont des petits virus non envelopp\u00E9s \u00E0 ADN double brin, qui infectent les \u00E9pith\u00E9liums cutan\u00E9s et muqueux. Tr\u00E8s largement r\u00E9pandus dans la population humaine, les infections sont la plupart du temps asymptomatiques, tandis qu'une minorit\u00E9 provoquent des verrues cutan\u00E9es, des condylomes acumin\u00E9s et des carcinomes. Les cancers induits par HPV repr\u00E9sentent 640 000 cas en 2012 dans le monde et sont localis\u00E9s au niveau anog\u00E9nital et au niveau des voies a\u00E9rodigestives sup\u00E9rieures.La transformation des cellules est induite en particulier par la surexpression de deux oncoprot\u00E9ines virales : E6 et E7, qui sont n\u00E9cessaires \u00E0 l'initiation, la promotion et la progression du ph\u00E9notype canc\u00E9reux. Leur extinction provoque d'ailleurs la mort des cellules canc\u00E9reuses. E6 et E7 favorisent par exemple la d\u00E9gradation de p53 et pRb, induisant ainsi une prolif\u00E9ration non contr\u00F4l\u00E9e et accrue des cellules infect\u00E9es. Mais les deux oncoprot\u00E9ines virales interagissent aussi avec plus de 150 partenaires prot\u00E9iques et d\u00E9r\u00E9gulent l'hom\u00E9ostasie cellulaire. Fait int\u00E9ressant, E6 et E7 modulent l'expression de nombreuses prot\u00E9ines impliqu\u00E9es dans l'\u00E9tablissement des marques \u00E9pig\u00E9n\u00E9tiques, impliqu\u00E9es dans la r\u00E9gulation de l'expression des g\u00E8nes. D'ailleurs, la surexpression des oncoprot\u00E9ines virales peut \u00EAtre li\u00E9e \u00E0 la m\u00E9thylation de l'ADN d'une partie du g\u00E9nome viral.Puisque E6 et E7 d\u00E9tournent la machinerie \u00E9pig\u00E9n\u00E9tique de la cellule, l'objectif du travail de th\u00E8se a \u00E9t\u00E9 d'\u00E9tudier les m\u00E9canismes mol\u00E9culaires r\u00E9gulant l'expression des oncoprot\u00E9ines lors du traitement des cellules de cancers du col par un agent d\u00E9m\u00E9thylant de l'ADN, le 5-aza-2'-d\u00E9oxycytidine (5azadC).Dans des cellules issues de cancers du col de l'ut\u00E9rus, nous avons observ\u00E9 qu'un traitement d\u00E9m\u00E9thylant induisait une r\u00E9pression de la prot\u00E9ine E6 et une d\u00E9stabilisation de ses transcrits, sugg\u00E9rant l'implication d'un miARN. Parmi les miARN ciblant les transcrits viraux, le miR-375 \u00E9tait le plus susceptible d'\u00EAtre impliqu\u00E9 dans la d\u00E9stabilisation des transcrits car (i) la m\u00E9thylation de son promoteur augmente avec la gravit\u00E9 des l\u00E9sions du col de l'ut\u00E9rus, (ii) il cible les transcrits viraux au niveau de cinq r\u00E9gions diff\u00E9rentes, et (iii) son expression est augment\u00E9e lors du traitement de cellules d\u00E9riv\u00E9es du cancer du col de l'ut\u00E9rus avec le 5azadC. Il s'est av\u00E9r\u00E9 que le miR-375 \u00E9tait effectivement impliqu\u00E9 dans la r\u00E9pression partielle des transcrits viraux lors du traitement. Les r\u00E9sultats de cette \u00E9tude sugg\u00E8rent par ailleurs qu'un autre m\u00E9canisme mol\u00E9culaire pourrait \u00EAtre impliqu\u00E9 dans cette r\u00E9pression. C'est pourquoi, dans un deuxi\u00E8me temps, nous avons \u00E9tudi\u00E9 l'implication possible d'un facteur de transcription, TBX2, dans la r\u00E9pression des transcrits viraux. Bien que le taux transcriptionnel de TBX2 soit augment\u00E9 lors du traitement des cellules avec des fortes concentrations de 5azadC, nos r\u00E9sultats sugg\u00E8rent que la prot\u00E9ine n'est pas exprim\u00E9e dans les cellules, m\u00EAme apr\u00E8s traitement, et que TBX2 ne r\u00E9gule pas l'activit\u00E9 du promoteur viral int\u00E9gr\u00E9 au g\u00E9nome cellulaire.Le traitement des cellules par l'agent d\u00E9m\u00E9thylant entra\u00EEne aussi une perte de viabilit\u00E9 en particulier des cellules Ca Ski. En effet, le 5azadC induit un blocage du cycle en G2/M dans ces cellules, une augmentation du pourcentage de cellules en Sub-G1 et un clivage de la PARP. Si le 5azadC est d\u00E9j\u00E0 utilis\u00E9 en clinique pour le traitement d'autres cancers, nos donn\u00E9es apportent un \u00E9clairage nouveau sur les m\u00E9canismes mol\u00E9culaires du 5azadC dans les cancers induits par HPV, qui pourraient ainsi \u00EAtre trait\u00E9s par cette mol\u00E9cule." . . "2019" . . "Papillomavirus humain de type 16" . . .