. "\u00C9longation (biologie mol\u00E9culaire)" . . "Indirect pathway of tRNA asparaginylation involves two particular enzymes, an aspartyl-tRNA synthetase (AspRS) that is able to aspartylate tRNAAsp as well as tRNAAsn and a tRNA-dependant amidotransferase (Adt) that converts Asp-tRNAAsn into Asn-tRNAAsn. This pathway, frequent in microorganisms, is used either to form Asn-tRNAAsn or to synthesize Asn. Our first investigations established the interrelation between structural and functional peculiarities of AspRS. AspRS from the archaebacterial structural group exhibits a dual specificity for tRNA whereas AspRS from the eubacterial group is monospecific. We have crystallized the dual-specific AspRS from Thermus thermophilus and comparison of its structure to that of a monospecific AspRS shows that specificity AspRS is due to a single loop that contacts the anticodon of tRNA. This observation has been confirmed by mutagenesis to convert a monospecific AspRS into a dual one. Preliminary studies had shown that Asn-tRNAAsn is not recognized by the elongation factor Tu, which is normally responsible for delivering aa-tRNA to the ribosome. The molecular basis of discrimination of Asp-tRNAAsn versus the correct aa-tRNA has been revealed by use of protein and tRNA variants. We have cloned and overproduced the Adt from T. thermophilus. We have shown its ability to amidate Asp-tRNAAsn as well as Glu-tRNAGln. We have also demonstrated that archaebacteria possessing a specific AspRS also possess the complete system for direct asparaginylation of tRNAAsn. Indeed, they also possess an asparagine synthetase that shares high identity with AspRS and AsnRS." . "ARN de transfert" . . . "Evolution des voies de formation d'asparagine et d'asparaginylation de l'ARNt" . . . . "Evolution des voies de formation d'asparagine et d'asparaginylation de l'ARNt" . "Th\u00E8ses et \u00E9crits acad\u00E9miques" . . . . "Synth\u00E8se prot\u00E9ique" . . . "Aminoacyl-ARNt synth\u00E9tases" . "Asparagine" . "Text" . "Arch\u00E9obact\u00E9ries" . . "2002" . . . "Les voies directe et indirecte d'asparaginylation de l'ARNt impliquent 2 enzymes particuli\u00E8res, une aspartyl-ARNt synth\u00E9tase (AspRS) capable de charger l'ARNtAsn et l'ARNtAsp aussi efficacement et une amidotransf\u00E9rase ARNt d\u00E9pendante (AdT) qui convertie l'Asp-ARNtAsn en Asn-ARNtAsn. Cette voie, fr\u00E9quemment utilis\u00E9e chez les microorganismes, est aussi bien employ\u00E9e pour la formation de l'Asn-ARNtAsn que pour la synth\u00E8se ARNt d\u00E9pendante de l'Asn. Nous avons \u00E9tabli l'interrelation structure-fonction particuli\u00E8re des AspRS. Les AspRS archaebact\u00E9riennes poss\u00E8dent une sp\u00E9cificit\u00E9 rel\u00E2ch\u00E9e alors que les AspRS eubact\u00E9riennes ont une sp\u00E9cificit\u00E9 stricte. Nous avons cristallis\u00E9 l'AspRS de sp\u00E9cificit\u00E9 rel\u00E2ch\u00E9e de Thermus thermophilus et la comparaison de sa structure avec celle d'une AspRS de sp\u00E9cificit\u00E9 stricte montre que la sp\u00E9cificit\u00E9 est due a une boucle qui contacte l'anticodon de l'ARNt. Cette observation a \u00E9t\u00E9 confirm\u00E9e par mutagen\u00E8se en convertissant la sp\u00E9cificit\u00E9 stricte d'une AspRS en sp\u00E9cificit\u00E9 rel\u00E2ch\u00E9e.Des \u00E9tudes pr\u00E9liminaires avaient sugg\u00E9r\u00E9 que l'Asn-ARNtAsn n'est pas reconnu par le facteur d'\u00E9longation EF-Tu, qui est normalement responsable de l'acheminement des aa-ARNt sur le ribosome. Les bases mol\u00E9culaires de la discrimination de l'Asp-ARNtAsn des aa-ARNt homologues ont \u00E9t\u00E9 r\u00E9v\u00E9l\u00E9es par l'utilisation de variant de l'ARNt et de la prot\u00E9ine.Nous avons clon\u00E9 et surproduit l'AdT de T. thermophilus et nous avons montr\u00E9 sa capacit\u00E9 d'amidation de l'Asp-ARNtAsn aussi bien que le Glu-ARNtGln. Nous avons \u00E9galement d\u00E9montr\u00E9 que certaines archaebact\u00E9ries poss\u00E8dent une AspRS de sp\u00E9cificit\u00E9 stricte et le syst\u00E8me complet de l'asparaginylation directe de l'ARNtAsn. En effet, ces organismes poss\u00E8dent une Asn synth\u00E9tase qui pr\u00E9sente environ 40% d'identit\u00E9 de s\u00E9quence avec les AspRS et les AsnRS." .