. "Ribosomes" . . "2010" . . . . . . "Fluorescence" . . . . "Biochemical characterization of YphC, a protein from Bacillus subtilis with two GTPases domains" . . . . "Ribosome" . "Bacillus subtilis" . "Th\u00E8ses et \u00E9crits acad\u00E9miques" . "Text" . "Genome sequencing programs have revealed many genes of unknown function. The systematic disruption of these genes revealed the essentiality for some of them. Studying orphan proteins became of first importance as they are ideal targets for new antibacterial compounds. YphC is a GTPase from Bacillus subtilis that meets these criteria. It is well conserved throughout bacterial kingdom but is not found in eukaryota or archeas, strengthening the choice of this protein as a future target for antibacterial drugs. YphC has the particularity to possess two GTPase domains in tandem. As a unique protein, we decided to study YphC from a biochemical point of view to better understand its catalytic mechanism. We overexpressed and purified the protein, either wild type or mutants. We measured its enzymatic constants and characterize potassium activation effect on its hydrolytic activity. We showed that YphC displays a high GTPase activity and that GD1 bears the majority of this activity .GD2 would thus have a regulatory role in the protein. We also studied the role of YphC in vitro. We showed that the protein was able to interact with ribosome from Bacillus subtilis in a nucleotide dependant manner, suggesting that YphC plays a role in ribosome biogenesis." . . "Caract\u00E9risation biochimique de YphC, une prot\u00E9ine de Bacillus subtilis \u00E0 deux domaines GTPases impliqu\u00E9e dans la biogen\u00E8se du ribosome" . . . "Caract\u00E9risation biochimique de YphC, une prot\u00E9ine de Bacillus subtilis \u00E0 deux domaines GTPases impliqu\u00E9e dans la biogen\u00E8se du ribosome" . "GTPase" . "GTPases" . "Les grands programmes de s\u00E9quen\u00E7age des g\u00E9nomes ont r\u00E9v\u00E9l\u00E9 l'existence de nombreux g\u00E8nes de fonction inconnue. L'invalidation syst\u00E9matique de ces g\u00E8nes chez les bact\u00E9ries a permis de r\u00E9v\u00E9ler le caract\u00E8re essentiel de certains d'entre eux. L'\u00E9tude des prot\u00E9ines issues de ces g\u00E8nes s'est amplifi\u00E9e ces derni\u00E8res ann\u00E9es car elles sont des cibles potentiellement int\u00E9ressantes pour le d\u00E9veloppement de nouvelles mol\u00E9cules antibact\u00E9riennes. YphC est une GTPase de Bacillus subtilis qui r\u00E9pond \u00E0 ces crit\u00E8res. Elle est tr\u00E8s conserv\u00E9e au sein des bact\u00E9ries mais n'est pas retrouv\u00E9e chez les organismes eucaryotes ou les archaebact\u00E9ries, ce qui fait d'elle une cible de choix pour le d\u00E9veloppement de nouvelles mol\u00E9cules antibact\u00E9riennes. YphC a la particularit\u00E9 de poss\u00E9der deux domaines GTPases en tandem. Unique en son genre, nous avons voulu \u00E9tudier cette prot\u00E9ine sous son aspect biochimique afin de mieux comprendre son m\u00E9canisme de fonctionnement. Nous avons donc mis au point la production et la purification de YphC et g\u00E9n\u00E9r\u00E9 des mutations ponctuelles ou des d\u00E9l\u00E9tions. Nous avons ainsi pu mesurer les constantes enzymatiques de cette prot\u00E9ine et caract\u00E9riser l'effet d'activation du potassium sur son activit\u00E9 d'hydrolyse du GTP. Nous avons ainsi montr\u00E9 la forte activit\u00E9 GTPase de la prot\u00E9ine port\u00E9e par le premier domaine GTPase et le r\u00F4le r\u00E9gulateur du deuxi\u00E8me domaine GTPase. Nous avons \u00E9galement \u00E9tudi\u00E9 le r\u00F4le de YphC par une approche in vitro. Nous avons pu ainsi montrer que YphC est capable d'interagir avec les ribosomes de fa\u00E7on nucl\u00E9otide d\u00E9pendante sugg\u00E9rant un r\u00F4le de la prot\u00E9ine dans les processus de biogen\u00E8se du ribosome." . "EngA" . . .