. . . . "Cellules souches" . "2023" . "Text" . . . . . "Ex vivo gene correction of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) has emerged as a promising therapeutic approach for the treatment of inherited human blood disorders.The new gene editing technologies for selectively targeting DNA using engineered nucleases and inserting at this specific site a therapeutic gene sequence has opened the door to many therapeutic applications. Several strategies can be used to insert a DNA sequence at a specific site in the genome.Strategies depending on the homology-directed repair (HDR) repair pathway requires DNA constructs with long homology arms that might exceed the cargo size limit of the vector used as DNA provider and lead to relatively low integration. Achieving HDR in HSPCs may also lead to low engraftment efficacy as HDR requires cell division. Alternatively, the Microhomology-mediated end joining (MMEJ) strategy can enable the insertion of a DNA template with less homology and has many advantages over the HDR in terms of the size of the required microhomology (MH) arm and the ability to target quiescent and proliferating cells.We invented a new platform called MiTiL (Microhomology meditated Target Integration using integrase-deficient lentiviral vector (IDLV).Here we demonstrated the efficiency and low toxicity profile of our MiTiL platform to achieve robust transgene integration in several therapeutic loci and safe harbor site in cell lines and CD34+ HSPCs.As a proof-of-concept, a GFP reporter gene and factor VIII (FVIII) / IL-2 Receptor common G-chain (IL2RG ) genes were targeted to a clinically relevant genetic locus (HBA, IL2RG) or safe harbor site (AAVS1) using IDLV virus vector and single guide RNA/Cas9 ribonucleoprotein (RNP) complexes. We demonstrate high levels of stable genome editing in K562, ED7R cell lines, and in HSPC primary cells.In conclusion, we have achieved efficient site-specific transgene integration in HSPCs utilizing a MMEJ-based approach to targeted gene addition. This platform provides an effective alternative to HDR-based transgene integration for the treatment of monogenic human diseases affecting the hematopoietic system, and so calls for additional pre-clinical testing and development." . . . . "Th\u00E8ses et \u00E9crits acad\u00E9miques" . "La correction g\u00E9nique ex vivo des cellules souches et prog\u00E9nitrices h\u00E9matopo\u00EF\u00E9tiques (HSPC) est apparue comme une approche th\u00E9rapeutique prometteuse pour le traitement des troubles sanguins h\u00E9r\u00E9ditaires chez l'homme.Les nouvelles technologies d'\u00E9dition g\u00E9n\u00E9tique permettant de cibler s\u00E9lectivement l'ADN \u00E0 l'aide de nucl\u00E9ases modifi\u00E9es et d'ins\u00E9rer sur ce site sp\u00E9cifique une s\u00E9quence g\u00E9n\u00E9tique th\u00E9rapeutique ont ouvert la porte \u00E0 de nombreuses applications th\u00E9rapeutiques. Plusieurs strat\u00E9gies peuvent \u00EAtre utilis\u00E9es pour ins\u00E9rer une s\u00E9quence d'ADN \u00E0 un site sp\u00E9cifique du g\u00E9nome.Les strat\u00E9gies d\u00E9pendant de la voie de r\u00E9paration dirig\u00E9e par l'homologie (HDR) n\u00E9cessitent des constructions d'ADN avec de longs bras d'homologie qui pourraient d\u00E9passer la taille limite du vecteur utilis\u00E9 comme fournisseur d'ADN et conduire \u00E0 une int\u00E9gration relativement faible. Atteindre le HDR dans les HSPC peut \u00E9galement conduire \u00E0 une faible efficacit\u00E9 de prise de greffe, car le HDR n\u00E9cessite une division cellulaire. Alternativement, la strat\u00E9gie de jonction des extr\u00E9mit\u00E9s m\u00E9di\u00E9e par la microhomologie (MMEJ) peut permettre l'insertion d'une matrice d'ADN avec moins d'homologie et pr\u00E9sente de nombreux avantages par rapport au HDR en termes de taille du bras de microhomologie (MH) requis et de capacit\u00E9 \u00E0 cibler les individus au repos et cellules en prolif\u00E9ration.Nous avons invent\u00E9 une nouvelle plateforme appel\u00E9e MiTiL (Microhomology meditated Target Integration using integrase-deficient lentiviral vector (IDLV).Ici, nous avons d\u00E9montr\u00E9 l'efficacit\u00E9 et le faible profil de toxicit\u00E9 de notre plateforme MiTiL pour obtenir une int\u00E9gration transg\u00E9nique robuste dans plusieurs loci th\u00E9rapeutiques et un site refuge dans les lign\u00E9es cellulaires et les HSPC CD34+.\u00C0 titre de preuve de concept, un g\u00E8ne rapporteur de la GFP et des g\u00E8nes de la cha\u00EEne G commune du facteur VIII (FVIII) / r\u00E9cepteur de l'IL-2 (IL2RG) ont \u00E9t\u00E9 cibl\u00E9s sur un locus g\u00E9n\u00E9tique cliniquement pertinent (HBA, IL2RG) ou un site refuge (AAVS1). ) en utilisant un vecteur viral IDLV et des complexes de ribonucl\u00E9oprot\u00E9ine (RNP) \u00E0 guide unique ARN/Cas9. Nous d\u00E9montrons des niveaux \u00E9lev\u00E9s d'\u00E9dition stable du g\u00E9nome dans les lign\u00E9es cellulaires K562, ED7R et dans les cellules primaires HSPC.En conclusion, nous avons r\u00E9alis\u00E9 une int\u00E9gration efficace de transg\u00E8nes sp\u00E9cifiques \u00E0 un site dans les HSPC en utilisant une approche bas\u00E9e sur MMEJ pour l'addition cibl\u00E9e de g\u00E8nes. Cette plate-forme offre une alternative efficace \u00E0 l'int\u00E9gration transg\u00E9nique bas\u00E9e sur le HDR pour le traitement des maladies humaines monog\u00E9niques affectant le syst\u00E8me h\u00E9matopo\u00EF\u00E9tique, et n\u00E9cessite donc des tests et un d\u00E9veloppement pr\u00E9cliniques suppl\u00E9mentaires." . . . . . "Lentivirus" . . "MMEJ-mediated IDLV knock-in via CRISPR/Cas9 in human hematopoietic stem/progenitor cells." . "MMEJ-mediated IDLV knock-in via CRISPR/Cas9 in human hematopoietic stem/progenitor cells." . "Th\u00E9rapie g\u00E9nique" . . . . "Plateforme MMEJ" . . "R\u00E9paration de l'ADN par jonction d'extr\u00E9mit\u00E9s -- Dissertation universitaire" . . "\u00C9dition g\u00E9n\u00E9tique" . . "Knock-in d'IDLV m\u00E9di\u00E9 par MMEJ via CRISPR/Cas9 dans des cellules souches/prog\u00E9nitrices h\u00E9matopo\u00EF\u00E9tiques humaines" . "CRISPR-Cas9" . "Prot\u00E9ine-9 associ\u00E9e \u00E0 CRISPR -- Dissertation universitaire" . . .